脂肪酶活性测定(46)
设备
1. 研究了一种具有Ag/AgCl参比电极的玻璃体组合电极的可膨胀刻度pH计.
2. 在恒温装置内搅拌反应容器(25ml)，如.g.、水浴、恒温块.
3. A类微型滴定管，2.00毫升含0.01毫升细分.
试剂
全部使用无碳酸盐，全玻璃蒸馏水，1型水制备
1. 橄榄油-阿拉伯胶乳剂. 慢慢溶解.6克金合欢胶浸在150毫升水中. 加入25ml试剂级, 低酸度橄榄油，低速搅拌10分钟，加水至250毫升.
2. 1.5 M NaCl
3. 0.015 M CaCl2
4. 0.054 M牛胆酸钠
5. Titrant; 0.010 M氢氧化钠，标准化
6. 0.1m NaOH
7. 酶:溶解1mg /ml于0.5 M Tris pH为8，含有5 mM脱氧胆酸钠
基质的制备，15.0 ml
按顺序5交付.0毫升橄榄油-金合欢胶乳剂.0 ml 1.5 M NaCl, 5.0 ml 0.015 M CaCl2和1.0 ml 0.054 M CaCl2和1.0 ml 0.054 M牛胆酸钠，在反应容器中混合均匀.
过程
用搅拌15ml底物25ºC±0平衡.2ºC的脂肪酶，EPC号.L397和EPC编号.HL938，和37°C±0.Lipase EPC No . 3ºC.LC452及EPC编号.IC398. 滴定至稳定的pH值8.5配0.1m NaOH. 添加0.002 to 0.004毫克的酶. 当pH值达到8时.启动计时器并传送滴定剂(0.0100 M氢氧化钠)，有从滴定管出口. 搅拌反应混合物表面以下5mm处. (使用硅胶管从滴定管尖端到反应混合物很方便.)保持pH值恒定.0静置2 ~ 4分钟，记录每分钟送出滴定液的样本量. 通过重复步骤15中的滴定来确定空白率.0 ml底物，不加酶. 滴定液的空白体积应小于0.10毫升，2到4分钟. 记录每分钟送出的滴定液空白体积.
比活度计算
单位 =(样品卷-空白卷)x 0.01200 x 1000
mg mg酶