人痰溶菌酶活性测定(45)
所需的材料
1. Buffer; 0.1 M Tris pH 7.5在25℃下制备. 溶解12.70 g Tris-HCl和2.36g tris碱900毫升水. 测定pH值，必要时用0滴定.1 M HCl或0.1 M NaHO至ph7.5在25°C. 加入水至1000毫升.
2. Substrate suspension; 0.04% w/v. 称取40毫克冻干的致裂微球菌放入一个200毫升的锥形烧瓶中. 加入100毫升Tris(在步骤1中准备).)，搅拌至悬浮液均匀. 每天准备新鲜食物.
3. 酶解. 溶解1.Tris缓冲液中0 mg / ml. 准备二次稀释0.缓冲液中05毫克/毫升. 将酶溶液放在冰浴中冷藏.
过程
1. 平衡分光光度计至450 nm，细胞温度至25°C.
2. 分发3.在细胞中加入0 ml底物悬浮液并平衡至25°C.
3. 添加0.0.05 ml的0.05毫克/毫升溶菌酶溶液, 混合后每隔1分钟测定吸光度的下降速率. 在3到6分钟内，下降的速度应该是线性的.
比活度计算
Vol = 3.005 A = 450 nm T = 25°C光程= 1 cm
Î， 1%， 1 cm = 17.60mg /ml = A280 × 0.568
单位 = ∆A / min x 1000 ml
mg 8.8 x 0.0025 mg