人肺胰蛋白酶活性(83)

的决心 人肺胰蛋白酶活性(83)

n -苯甲酰- ph - val - arg - pna测定. NB32)作为衬底.

所需的材料

1.     Buffer; 0.1 M Tris pH 8.3在25℃下制备. 混合0.1 M Tris-HCl变成0.1 M三碱，直到pH =
8.3 . 25℃.

2.     Buffer; 0.05 NaOAc pH.0. 混合0.05 M HAc变为0.05 M NaOAc，直至pH = 5.25℃时为0.

3.     Substrate Solution; 1.0 mM. 溶解68.0 mg. n -苯甲酰- ph - val - arg - pna.
NB32)加入1ml 1-甲基-2-吡咯烷酮中. 加入tris缓冲液至100毫升.
 

4.     酶解. 溶解为1.0毫克每毫升.05 M NaOAc pH. 保持在5°C.
 

过程

1.     将分光光度计调至410 nm，细胞温度调至25ºC.

2.     吸管2.70毫升缓冲液(pH值8).3 . Tris)进入细胞. 添加0.3ml底物溶液. 混合，平衡到
25°C.

3.     加入5μl酶溶液，测定从初始反应开始每分钟吸光度的增加.
 

比活度计算 

Vol = 3.1毫升                = 410海里T = 25ºC光路= 1厘米

Î， 1 mM酪氨酸= 0.964

单位  =  (∆A_256/最小)x (3.01 ml)
mg              0.964 x 0.001 mg