人痰弹性酶活性的测定(62)
meo - su - ala - ala - pro - val - pna测定. FH237)作为底物.
所需的材料
1. Tris-NaCl buffer; 0.1 M Tris pH 7.5在25ºC含0.5 M NaCl. 溶解12.70 g Tris-HCl, 2.36g Tris-base和29.22g NaCl, 900 ml H2O. 测定pH值，必要时用0滴定.1 M HCl或0.1m NaOH到ph7.5在25ºC. 用H调至1000毫升2O.
2. 底物溶液0.2 mM. 溶解12.0 mg meo - su - ala - ala - pro - val - pna. FH237) in 1.0毫升1-甲基-2-吡咯烷酮. 加入Tris-NaCl缓冲液至最终体积为100 ml.
3. 弹性蛋白酶解. 溶解1.0毫克每毫升.05 M NaOAc pH 5含0.1 M NaCl. 准备二次稀释0.在相同的缓冲液中每毫升添加10毫克. 在冰浴中保持两种溶液的低温.
过程
1. 将分光光度计调至410 nm，细胞温度调至25ºC.
2. 平衡3.0 ml底物溶液在细胞中加热至25℃.
3. 添加0.01 ml弹性蛋白酶溶液(0.10 mg/ml)，混合，每隔2-3分钟测定吸光度的增加速度. 增加的速度应该是线性的，持续5到10分钟.
比活度计算
Î, 1% , 280 = 6.65 mg/ml = A280 x1.50
Vol = 3.1毫升 = 410海里T = 25ºC光路= 1厘米
单位 = ∆A/min x 3.01 ml
mg 8.8 x 0.001 mg